诊断学第七版教材
生殖道支原体初次分离较慢,一般需10天左右才生长出“荷包蛋”状菌落,故而不适合
于临床快速诊断。DNA探针技术和荧光定量PCR技术目前已用于临床实验室的检测。
2.螺旋体检测 螺旋体是一群细长、柔软、运动活泼、呈螺旋状的微生物。将标本
置于暗视野显微镜下检查运动活泼、具有特殊形态的螺旋体具有诊断意义。除钩端螺旋体
外,其他螺旋体如梅毒螺旋体、伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体等尚不能人工培养,因而,
血清学诊断广泛应用于临床实验检测。显微镜凝集试验、间接凝集试验、酶联免疫吸附试
验检测患者血清中的特异性抗体是常用的血清方法。用性病研究实验室玻片试验
(vDRL)或快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)对梅毒患者血清进行过筛试验,出现
阳性者再用荧光密螺旋体抗体吸附试验(FTA—ABS)或抗梅毒螺旋体微量血凝试验
(MHA—TP)作确诊试验。PCR检测可快速检测出螺旋体特异核酸片段,目前,已逐步
成为常用的检测方法。
3.立克次体检测 立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,在形态结
构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似:具有细胞壁;以二分裂方式繁殖;含有
RNA和DNA两种核酸;由于酶系统不完整需在活细胞内寄生;对多种抗生素敏感等。立
克次体病多数是自然疫源性疾病,且人畜共患。取血液或组织进行立氏立克次体血清学试
验,分离培养和鉴定,通过荧光染色从皮肤或其他组织中找到病原体有助于确定诊断。血
清学诊断需取3份血清标本,即发病第1周、第2周、第4~6周。PCR通过检测立克次
体特异性核酸可进行早期诊断。外斐试验为非特异性血清学诊断试验,用于斑疹伤寒、斑
点热和恙虫病的确诊,特异性缸清学试验有免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验和补体结合
试验等。
4.衣原体检测 衣原体是不活动的专性细胞内寄生物,有化学上与革兰阴性菌相似
的细胞壁,具有核糖体,可出现胞质内包涵体。直接显微镜检查细胞质内的典型包涵体对
衣原体感染诊断有参考价值。衣原体的分离培养与病毒培养一样,在鸡胚卵黄囊内生长良
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好,还可采用动物接种和细胞培养法。过去采用传统的组织培养分离衣原体的方法,技术
难度大,特异性和敏感性均不理想,且费时费钱。目前应用较多的是荧光标记单克隆抗体的
直接荧光抗体法,可快速确定系何种血清型衣原体感染。DNA探针技术和荧光定量PCR技
术目前已经应用于衣原体疾病的诊断、流行病学调查和无症状衣原体携带者的诊断。
5.严重急性呼吸道综合征(SARS)病毒的检测 SARS俗称“非典型肺炎”。SARS
病毒属于单正链RNA病毒(positive single—strand RNA virus)。首例SARS病例于2002年
¨月报道,是冠状病毒科的一个新变种。随后,sARS病毒迅速波及全球,对全球人类形
成了严重的生命威胁。SARs的诊断主要依据流行病学史和各种实验室检查。目前,
sARS的实验室检测手段主要包括:①免疫学方法一一免疫荧光试验(IAF)和酶联免疫
吸附试验(EI.ISA)可在1~2h内快速检测sARs抗体。②基因检测方法——包括RT—
PcR、巢式RT—PCR(:rlested RT—PCR)和荧光定量PCR,其中,荧光定量PCR具有
灵敏度高、特异性强等特点,可进行病毒早期感染诊断,是SA.RS实验室诊断的重要手段
之一。③细胞培养——是鉴别SARs感染最为准确的一种方法,其培养宿主细胞为非洲绿
猴正常肾脏细胞(VER()E6),可从电子显微镜下直接观察培养细胞中的病毒颗粒,因此
十分准确,但是,其技术难度高,操作复杂,所需时间长等限制了细胞培养用于大量检测
和快速诊断。
(六)实验结果分析和临床应用
各种实验诊断方法中,临床标本分离和培养的阳性结果最具有诊断价值。经病原体鉴
定,可明确诊断病原体的种,并可作药物敏感试验。然而,分离培养的阴性结果并不能完
全排除感染的可能。常因标本采集运送的不当,培养条件不适合,病原体为难培养菌或已
使用抗生素/抗菌素治疗的患者均会出现假阴性结果,尤其是标本直接涂片镜检见细菌而
培养阴性者需考虑是否为I。型细菌、厌氧菌或苛养菌。
病原体的抗原成分检测有助于早期诊断感染性疾病,阳性结果提示某种感染性病原体
的存在,但对于那些存在正常菌群的标本,需考虑共同抗原引起的交叉反应,必须在设有
严格对照试验和排除试验时,阳性结果才能作出正确判断。
核酸检测已成为现代感染性疾病早期诊断的可靠方法之一。由于PcR技术具有很高
的敏感性,影响因素多,容易出现假阴性或假阳性结果,因此,操作者应严格按照操作规
程和程序,设立阴性和阳性对照,避免结果出现误差。其阳性结果只能说明标本内有某种
病原体的核酸,但是否为现期感染病原体则难以肯定。血清学试验是目前应用最广泛的感
染性疾病检测方法。用已知特异性抗原检测患者体内存在的特异性抗体,以出现IgM抗
体或高效价IgG抗体为阳性判断结果有重要诊断意义,并可作出现期感染的结论。为排除
隐性感染或回忆反应,常需作双份血清抗体的动态检测。IgM检测不仅可作早期诊断,且
可区分为原发性感染或复发性感染,在检测时应注意排除类风湿因子的干扰。
第四节病毒性肝炎检测
病毒性肝炎主要有7型,即甲型(HA)、乙型(HB)、丙型(Hc)、丁型(HD)、戊
型(HE)、庚型(HG)、输血传播病毒肝炎,它们分别由肝炎病毒甲型(HAV)、乙型
(HBV)、丙型(HcV)、丁型(HDV)和戊型(HEV)、庚型(HGV)、输血传播病毒
(TTV)所引起。几年前发现的己型肝炎病毒(HFV)与乙型(HBV)的关系仍有待确
认。近年发现的与人类肝炎有关的GB病毒和SEN病毒的研究尚处于初期探索阶段。肝
炎病毒标志物主要包括各型肝炎病毒相关抗原、抗体及核酸。目前常用的检测方法有:针
对抗原或抗体的酶联免疫法(EIA,EI。ISA)、放射免疫法(RIA)、血细胞凝集法
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(RPHA,PHA);针对核酸的斑点杂交法、聚合酶链反应法(PcR)等。
一、甲型肝炎病毒标志物检测
HAV属微小RNA病毒科,是一种无囊膜正20面体颗粒,直径27~32nm,内含一
条线状单正股RNA基因组,外由衣壳包封而成核壳体。现用于临床的病毒标志物有甲型
肝炎病毒抗原HAVAg、甲型肝炎病毒抗体(IgM、IgA和Ig(')及HAV—RNA。
(一)甲型肝炎病毒抗原测定
【参考值】EuSA法检测血清HAV颗粒为阴性,放射免疫(RIA)法或免疫电镜
(IEM)检测粪便HAV颗粒为阴性。
【临床意义】 HAVAg阳性:见于70.6%~87.5%的甲肝患者。HAVAg于发病前
2周可从粪中排出,其发病第一周粪便的阳性率为42.9%,l~2周为18.3%,2周后消
失,粪便中HAV或HAV抗原颗粒的检测可作为急性感染的证据。
(二)甲型肝炎病毒抗体测定
机体感染HAV后,可产生IgM、IgA和IgG抗体。HAV—IgM是病毒衣壳蛋白抗
体,HAV—IgA是肠道黏膜分泌的局部抗体,HAV—Ig('在病愈后可长期存在。
【参考值】 EI。IsA法:抗HAV—IgM和抗HAV—IgA均为阴性。抗HAv—IgG阳
性可见于甲肝感染后的人群。
【临床意义】①抗HAVIgM阳性:据观察,甲肝患者抗HAV IgM的阳性率,在发
病后2周为100%,1个月为76.5%,3个月为23.5%,6个月为5.9%,12个月时可为阴
性。所以,抗HAV IgM阳性说明机体正在感染HAV,它是早期诊断甲肝的特异性指标。
②抗HAV IgA阳性:甲肝早期和急性期,由粪便中测得抗HAV IgA呈阳性反应,是早
期诊断甲肝的指标之一。③抗HAV IgG阳性:出现于恢复期且持久存在,是获得免疫力
的标志,提示既往感染,可作为流行病学调查的指标。
(三)HAV—RNA测定
【参考值】 逆转录聚合酶链反应(RT—PcR)法为阴性。
【临床意义】HAV—RNA阳性:对诊断,特别对早期诊断具有特异性。可检测粪便
排毒情况和污染的水源与食物,有利于及时监测与预防甲型肝炎。可作基因分型研究。
二、乙型肝炎病毒标志物检测
乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒,属于包膜病毒。现用于临床
的病毒标志物有乙型肝炎病毒表面抗原(}mpatitis B virus surface antigen,HBsAg)、乙
型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B virus surface antibodyr,抗一HBs)、乙型肝炎病毒e抗原
(hepatitis B virus e antigerL,HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(hepatitis B virus e antibod—
y,抗一H_Be)、乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitis B virus core antigen,HBcAg)、乙型肝
炎病毒核心抗体(1aepatitis B virus core antibodyr,抗一HBc)、乙型肝炎病毒表面抗原蛋白
前s2和前S2抗体、乙型肝炎病毒DNA。
(一)乙肝六项测定
传统乙型肝炎病毒标志物检测常为五项联合检测,俗称“乙肝二对半检测”,包括
HBsAg、抗一HBs、HBeAg、抗一HBe、抗一HBc。随着方法学发展,HBcAg也被加入检
测范围。乙型肝炎病毒标志物联合检测情况与分析见表4—9—2。
【参考值】各项指标EI。IsA法为阴性(s/co≤2.1;S/c0:样品与对照的光密度比
值);放射免疫分析(RIA)法为阴性。
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